Kit de Ensaio de Endotoxina rFC Sustentável - Teste BET Confiável de Fornecedores e Fábrica da China
Informações técnicas sobre o ensaio fluorimétrico do fator C recombinante (rFC) para detecção de endotoxinas bacterianas
O ensaio fluorimétrico rFC é um método in vitro, livre de caranguejo-ferradura, para a detecção quantitativa de endotoxinas bacterianas (lipopolissacarídeo, LPS), em conformidade com as farmacopeias globais (USP , EP 2.6.14). Seu princípio fundamental baseia-se no Fator C recombinante (rFC) — uma proteína recombinante produzida a partir do domínio de ligação ao LPS do Fator C do caranguejo-ferradura — eliminando a dependência do sangue natural do caranguejo-ferradura e abordando preocupações de sustentabilidade.
1. Princípio do Ensaio
A endotoxina LPS liga-se especificamente ao domínio de reconhecimento de LPS da rFC, desencadeando uma mudança conformacional que ativa a atividade da serina protease da rFC. A intensidade da fluorescência do AMC é diretamente proporcional à concentração de endotoxina na amostra, mensurável por meio de um leitor de microplacas de fluorescência.
2. Principais parâmetros técnicos
- Sensibilidade: Detecta endotoxinas em concentrações tão baixas quanto 0,005 EU/mL, igualando ou superando os ensaios tradicionais de lisado de amebócitos de Limulus (LAL).
- Faixa linear: Normalmente abrange faixas de 0,005 a 50 EU/mL, permitindo análises quantitativas em um amplo espectro de concentrações.
- Especificidade: Apresenta alta especificidade para LPS; não é ativado por (1→3)-β-D-glucanos (uma interferência comum em ensaios de gel-coagulação LAL), reduzindo resultados falso-positivos.
- Condições de incubação: Requer temperatura controlada (37±1°C) e tempo de incubação (60–120 minutos), com fluorescência medida em comprimentos de onda de excitação/emissão de ~360 nm/~460 nm.
3. Visão geral do fluxo de trabalho
- 1Preparar amostras (ex.: produtos farmacêuticos, dispositivos médicos, produtos biológicos) por meio de diluição ou extração para remover interferências da matriz.
- 2Misture o reagente rFC, o substrato fluorogênico e a amostra em um poço da microplaca.
- 3Incubar a 37°C para permitir a ligação, ativação e clivagem do substrato LPS-rFC.
- 4Medir a intensidade da fluorescência; calcular a concentração de endotoxina usando uma curva padrão gerada com padrões de endotoxina conhecidos (por exemplo, LPS de Escherichia coli O55:B5).
Este ensaio combina sustentabilidade (sem necessidade de captura de caranguejos-ferradura), confiabilidade (baixa interferência, alta reprodutibilidade) e eficiência, tornando-o ideal para o controle de qualidade nas indústrias farmacêutica e biotecnológica.
Perguntas frequentes (FAQ)
O que é o ensaio do Fator C Recombinante (rFC)?
O ensaio rFC é um método in vitro moderno, livre de caranguejos-ferradura, usado para a detecção quantitativa de endotoxinas bacterianas (lipopolissacarídeos). Ele serve como uma alternativa ecologicamente correta aos ensaios LAL tradicionais.
O ensaio rFC está em conformidade com as farmacopeias internacionais?
Sim, o ensaio fluorimétrico rFC é reconhecido e está em conformidade com as principais farmacopeias globais, incluindo USP e EP 2.6.14, para testes de endotoxinas.
Qual a sensibilidade do ensaio fluorimétrico rFC?
O ensaio é altamente sensível, capaz de detectar endotoxinas bacterianas em concentrações tão baixas quanto 0,005 EU/mL, o que iguala ou supera o desempenho dos métodos LAL tradicionais.
O ensaio rFC produz resultados falso-positivos para glucanos?
Não. Ao contrário dos ensaios LAL tradicionais, o ensaio rFC apresenta alta especificidade para LPS e não é ativado por (1→3)-β-D-glucanos, reduzindo significativamente os resultados falso-positivos.
Quais são os parâmetros de incubação padrão para o ensaio?
O ensaio requer incubação a uma temperatura controlada de 37±1°C durante 60 a 120 minutos. A intensidade da fluorescência é posteriormente medida em comprimentos de onda de aproximadamente 360 nm (excitação) e 460 nm (emissão).