Solução para Validação da Remoção de Pirógenos Utilizando Estufas de Esterilização por Calor Seco e Indicadores de Endotoxinas
Solução para Pirogênio Validação da remoção utilizando estufas de esterilização por calor seco e indicadores de endotoxina
BETMATObjetivo da Validação
Nesta validação, um forno é usado para simular as condições do processo de esterilização por calor secoCombinado com indicadores de endotoxinas, confirma-se que o procedimento específico de esterilização por calor seco pode remover eficazmente pirogênios (principalmente endotoxinas bacterianas) de itens a serem esterilizados (como itens resistentes ao calor, incluindo utensílios de vidro e metal), garantindo que o teor de endotoxinas nos itens esterilizados atenda aos requisitos.
Este protocolo aplica-se à validação da esterilização por calor seco e remoção de pirogênios em utensílios resistentes a altas temperaturas (por exemplo, seringas de vidro, alças de inoculação de aço inoxidável) utilizando uma estufa de circulação de ar quente para esterilização por calor seco sob parâmetros de processo específicos (temperatura, tempo, etc.). O indicador de endotoxina utilizado no processo de validação é o Endotoxin Challenge Vial (Indicador de Endotoxina) com um nível de endotoxina ≥1000 EU/frasco da BETMAT Biotechnology, número de catálogo ECV1K.
Preparação para a pré-validação
3.1 Preparação do Pessoal
1. Estabeleça uma equipe de validação e esclareça as responsabilidades de cada membro. A equipe inclui pessoal de Garantia da Qualidade (GQ), pessoal de Controle da Qualidade (CQ), pessoal técnico de produção e pessoal de gestão de equipamentos.
2. Realizar treinamento para os membros da equipe de validação. O conteúdo do treinamento abrange os princípios da esterilização por calor seco e remoção de pirogênios, procedimentos de operação do forno, métodos de utilização de indicadores de endotoxinas, conteúdo do protocolo de validação e requisitos regulatórios relevantes (por exemplo, BPF). Após o treinamento, uma avaliação deverá ser realizada para garantir que os membros estejam aptos a concluir o trabalho de validação.
3.2 Preparação de Equipamentos e Utensílios
1. Forno: Confirme se o forno concluiu a Qualificação de Equipamento (QI, QO) e se seu desempenho atende aos requisitos. Verifique se componentes como o sistema de controle de temperatura, o ventilador de circulação e o sistema de exaustão de umidade do forno estão funcionando normalmente. Calibre os sensores de temperatura do forno, garantindo que o certificado de calibração esteja dentro do prazo de validade e que a precisão da calibração atenda aos requisitos de validação (por exemplo, ±1 °C).
2. Indicadores de Endotoxina: Adquira indicadores de endotoxina de fornecedores qualificados. Verifique se a embalagem está intacta e sem danos, se os rótulos estão legíveis (incluindo informações como nível de endotoxina, número do lote e data de validade), armazene-os de acordo com as condições especificadas no manual do produto (refrigeração entre 2 e 8 °C) e mantenha registros de armazenamento adequados.
3. Outros utensílios: Prepare os reagentes LAL (lisado de amebócitos de Limulus) necessários para o teste de endotoxinas, registradores de temperatura calibrados, cronômetros, etc. Todos os utensílios devem ser comprovadamente livres de pirogênios.
3.3 Preparação de Documentos
1. Reúna documentos como o manual do equipamento do forno, certificados de calibração e registros de manutenção.
2. Obtenha o manual do produto e o Certificado de Análise dos indicadores de endotoxina.
3. Desenvolver um Procedimento Operacional Padrão (POP) para teste de endotoxina, especificando os métodos, etapas e critérios de avaliação de resultados para testes de endotoxinas.
4. Preparar formulários de aprovação do protocolo de validação e formulários de registro de validação (por exemplo, registros de distribuição de temperatura do forno, registros de colocação e recuperação do indicador de endotoxina, registros de testes de endotoxina).
características
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4.1 Teste de Distribuição de Calor sem Carga
1. Objetivo: Confirmar a uniformidade da distribuição de temperatura em diversas áreas do forno em condições de vazio, garantir que não haja zonas mortas de temperatura evidentes e fornecer uma base para a validação subsequente com carga.
2. Etapas de operação
● Posicione as sondas do registrador de temperatura de forma adequada, levando em consideração o tamanho e a estrutura do forno. Normalmente, as sondas são colocadas nas camadas superior, intermediária e inferior do forno, e nas posições frontal, central, traseira, esquerda e direita de cada camada, para garantir a cobertura de toda a área de trabalho efetiva do forno. O número de sondas deve ser de, no mínimo, 9 (para fornos grandes, esse número pode ser aumentado conforme necessário).
● Conecte o registrador de temperatura a um computador, defina o intervalo de registro (por exemplo, 1 minuto), ligue a estufa e execute os processos de aquecimento, manutenção da temperatura e resfriamento de acordo com os parâmetros predefinidos do processo de esterilização por calor seco (por exemplo, 250 °C por 30 minutos).
● Monitore e registre os dados de temperatura de cada sonda em tempo real durante todo o processo. Interrompa a gravação assim que o forno esfriar até a temperatura ambiente.3. Avaliação dos Resultados: Durante a fase de conservação de calor, a temperatura de todas as sondas deve estar dentro da faixa de ±3℃ da temperatura definida (a faixa de desvio específica pode ser ajustada de acordo com as normas ou requisitos do produto), e a duração deve atingir o tempo de conservação de calor definido. Caso isso ocorra, o teste de distribuição de calor sem carga é considerado aprovado. Se houver áreas onde o desvio de temperatura exceda o padrão, analise as causas (por exemplo, falha do ventilador de circulação, bloqueio do duto de ar), tome as medidas corretivas correspondentes (por exemplo, reparo do ventilador, limpeza do duto de ar) e repita o teste de distribuição de calor sem carga até que seja aprovado.
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4.2 Teste de Distribuição de Calor e Penetração de Calor sob Carga
1. Objetivo: Confirmar a uniformidade da distribuição de temperatura em diversas áreas da estufa quando os itens a serem esterilizados são colocados, e garantir que o calor penetre efetivamente nas partes centrais dos itens a serem esterilizados, de modo que cada parte dos itens atinja a temperatura e o tempo de esterilização especificados.
2. Etapas de operação
● Coloque os itens a serem esterilizados no forno de acordo com o método de carregamento de produção real (por exemplo, carga completa, meia carga, carga mínima, etc., incluindo pelo menos carga completa e condições de carga máxima).
● Posicione as sondas do registrador de temperatura em diferentes posições dos itens a serem esterilizados (por exemplo, partes importantes como a superfície, o interior e os cantos) e em áreas representativas da estufa. O número de sondas deve ser, no mínimo, o utilizado no teste sem carga, e assegure-se de que cada parte importante dos itens a serem esterilizados seja monitorada por uma sonda para verificar a penetração do calor.
● Ligue o forno, opere-o de acordo com os parâmetros predefinidos do processo de esterilização por calor seco e registre os dados de temperatura de cada sonda em tempo real.
● Após a conclusão do procedimento de esterilização e o resfriamento do forno à temperatura ambiente, interrompa a coleta de dados, organize e analise os dados de temperatura.3. Avaliação dos Resultados: Durante a fase de conservação de calor, a distribuição de temperatura em diversas áreas do forno deve atender aos padrões de qualificação do teste de distribuição de calor sem carga, e a temperatura das partes centrais dos itens a serem esterilizados deve atingir a temperatura de esterilização definida e manter o tempo de conservação de calor especificado. Caso isso ocorra, o teste de distribuição de calor com carga e o teste de penetração de calor são considerados qualificados. Caso contrário, ajuste o método de carregamento, otimize os parâmetros do processo ou inspecione o desempenho do equipamento e repita o teste.
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4.3 Teste de Provocação de Endotoxinas
1. Objetivo: Utilizar indicadores de endotoxina para simular os pirogênios que podem estar presentes nos itens a serem esterilizados e verificar se o procedimento de esterilização por calor seco consegue reduzir a endotoxina a um nível seguro (geralmente exigindo que o teor de endotoxina seja inferior a 0,1 EU/mL, com valores específicos determinados de acordo com os requisitos do produto).
2. Etapas de operação
● Preparação dos Indicadores de Endotoxina: De acordo com as instruções do manual do produto, trate os indicadores de endotoxina adequadamente (por exemplo, dissolução e diluição; os indicadores de endotoxina da BETMAT Biotechnology podem ser usados diretamente) para garantir a precisão e a uniformidade da concentração de endotoxina.
● Posicionamento dos Indicadores de Endotoxina: Posicione os indicadores de endotoxina nos locais com temperaturas mais baixas ou penetração de calor mais lenta (ou seja, locais de pior caso) identificados no teste de distribuição e penetração de calor sob carga, bem como nas partes principais dos itens a serem esterilizados. Coloque pelo menos 2 indicadores de endotoxina em cada ponto de posicionamento. Enquanto isso, posicione controles positivos (indicadores de endotoxina não esterilizados) e controles negativos (água reagente LAL) fora da estufa.
● Processo de esterilização por calor seco: Ligue o forno e execute a operação de esterilização de acordo com os parâmetros predefinidos para o processo de esterilização por calor seco. Durante o processo, registre os dados de temperatura de acordo com os requisitos do teste de distribuição de calor e penetração de calor para garantir que o processo de esterilização atenda aos requisitos do processo.
● Recuperação dos indicadores de endotoxina: Após a conclusão do procedimento de esterilização, retire os indicadores de endotoxina da estufa quando esta arrefecer a uma temperatura adequada (por exemplo, abaixo de 40 °C) e identifique-os corretamente para evitar confusões.
● Teste de endotoxinas: De acordo com o POP para teste de endotoxinas, utilize reagentes LAL para testar os indicadores de endotoxinas recuperados, os controles positivos e os controles negativos. Os métodos de teste podem incluir o método gel-coagulante ou o método fotométrico. Para o método gel-coagulante, podem ser utilizados reagentes LAL com sensibilidade de 0,06 EU/mL. Para o método fotométrico, podem ser utilizados kits de teste de endotoxinas que utilizam o método turbidimétrico cinético ou o método cromogênico cinético.3. Julgamento do Resultado
● O controle negativo não deve apresentar reação à endotoxina (por exemplo, ausência de formação de gel no método de gel-coagulação, valor de detecção abaixo do limite de detecção no método fotométrico), e o controle positivo deve apresentar reação evidente à endotoxina (por exemplo, formação de gel firme no método de gel-coagulação, valor de detecção superior ao limiar correspondente à concentração do controle positivo). Caso contrário, os resultados do teste são inválidos e o teste de provocação com endotoxina deve ser repetido.
● Todos indicadores de endotoxina O tratamento com esterilização por calor seco não deve apresentar reação de endotoxina no teste, ou seja, o teor de endotoxina deve estar abaixo do nível de segurança especificado. Nesse caso, o teste de provocação com endotoxina é aprovado, indicando que o procedimento de esterilização por calor seco é eficaz na remoção de pirogênios. Se algum indicador de endotoxina apresentar resultado positivo, analise as causas (por exemplo, posicionamento incorreto dos indicadores de endotoxina, parâmetros insuficientes do processo de esterilização, falha do equipamento), tome as medidas corretivas necessárias e repita o teste de provocação com endotoxina até que o resultado seja aprovado.
5.1 Avaliação dos Resultados da Validação
Avalie de forma abrangente os resultados do teste de distribuição de calor sem carga, do teste de distribuição de calor com carga e penetração de calor, e do teste de desafio com endotoxinas. Se todos os itens de teste atenderem aos padrões de qualificação predefinidos, a validação atual de esterilização por calor seco e remoção de pirogênios será considerada qualificada, e o procedimento de esterilização por calor seco da estufa poderá ser utilizado para a remoção de pirogênios dos itens especificados a serem esterilizados. Se algum item de teste não atender aos padrões, realize uma investigação de desvio, desenvolva e implemente medidas corretivas e repita os testes relevantes até que todos os itens estejam qualificados.
5.2 Elaboração do Relatório de Validação
Após a conclusão do trabalho de validação, a equipe de validação deverá coletar e organizar todos os dados e registros de validação e preparar um relatório de validação. O relatório de validação deverá incluir o seguinte conteúdo:
1. Objetivo, escopo e base da validação (regulamentos, normas, POPs, etc. relevantes).
2. Membros da equipe de validação e suas responsabilidades.
3. Preparação pré-validação (treinamento de pessoal, preparação de equipamentos e utensílios, preparação de documentos, etc.).
4. Etapas operacionais detalhadas, dados de teste, análise de resultados e avaliação para cada item de validação.
5. Desvios (se houver): Descrição detalhada dos desvios ocorridos durante o processo de validação, incluindo o horário, local, fenômeno do desvio, análise da causa, medidas corretivas e efeito da implementação.
6. Conclusão da validação: Declare claramente se o procedimento de esterilização por calor seco é qualificado e se pode ser usado para a remoção de pirogênios dos itens especificados a serem esterilizados.
7. Recomendações: Com base nos resultados da validação, apresente recomendações para manutenção subsequente, ciclo de revalidação, etc.
8. Anexos: Incluindo formulários de aprovação de protocolo de validação, vários formulários de registro de validação, certificados de calibração de equipamentos, manuais de produtos de indicadores de endotoxina, relatórios de testes de endotoxina, etc.
Após a elaboração do relatório de validação, este deverá ser revisado e aprovado de acordo com o processo de aprovação de documentos da empresa. O relatório de validação aprovado deverá ser arquivado e gerenciado pelo departamento de Garantia da Qualidade.
6.1 Revalidação
1. A revalidação da esterilização por calor seco e da remoção de pirogênios deve ser realizada nas seguintes circunstâncias:
● Manutenção ou modificação substancial do forno (por exemplo, substituição de tubos de aquecimento, ventiladores de circulação, sistemas de controle de temperatura, etc.).
● Alterações significativas no tipo, especificação ou método de carregamento dos itens a serem esterilizados.
● Alterações nos parâmetros do processo de esterilização por calor seco (ex.: temperatura, tempo).
● Revalidação periódica: Geralmente realizada uma vez por ano. O ciclo específico pode ser ajustado de acordo com a frequência de uso do forno, o estado de manutenção e os dados históricos de validação, mas não deve exceder 2 anos.
2. O conteúdo da revalidação pode ser simplificado ou ajustado adequadamente de acordo com as circunstâncias específicas, com foco nos itens-chave que podem afetar o efeito da esterilização (por exemplo, teste de distribuição de calor e penetração de calor, teste de desafio com endotoxina).
6.2 Monitoramento Diário
1. Cada vez que o forno for utilizado para esterilização por calor seco e remoção de pirogênios, o operador deverá seguir os procedimentos de operação do forno e registrar os parâmetros operacionais do mesmo (por exemplo, temperatura, tempo, estado de carregamento, etc.).
2. Realizar manutenção regular no forno, incluindo limpeza, lubrificação, inspeção e outros trabalhos de acordo com o plano de manutenção do equipamento, e manter registros de manutenção adequados.
3. Calibre regularmente os sensores e registradores de temperatura do forno para garantir que sua precisão atenda aos requisitos. O ciclo de calibração deve ser realizado de acordo com as normas vigentes ou o manual do equipamento (geralmente a cada 3 a 6 meses).
4. Realize amostragem aleatória de itens esterilizados para teste de endotoxinas a fim de monitorar o efeito da esterilização. Se o teste de endotoxinas apresentar resultados insatisfatórios, interrompa imediatamente o uso da estufa, realize uma investigação de desvio e tome medidas corretivas, e realize uma revalidação, se necessário.